Art. 6

Art. 6

In vigore dal 22 dic 1987
Il presente regolamento entra in vigore il 1° gennaio 1988. Il presente regolamento è obbligatorio in tutti i suoi elementi e direttamente applicabile in ciascuno degli Stati membri. Fatto a Bruxelles, il 22 dicembre 1987. Per la Commissione COCKFIELD Vicepresidente (1) GU n. L 256 del 7. 9. 1987, pag. 1. (2) GU n. L 376 del 31. 12. 1987, pag. 1. (3) GU n. L 141 del 12. 6. 1969, pag. 24. (4) GU n. L 158 del 13. 6. 1986, pag. 1. (5) GU n. L 141 del 12. 6. 1969, pag. 1. (6) GU n. L 323 del 29. 11. 1980, pag. 1. (7) GU n. L 352 del 15. 12. 1987, pag. 29. (8) GU n. L 323 del 29. 11. 1980, pag. 7. (9) GU n. L 382 del 31. 12. 1987, pag. 27. ALLEGATO I DETERMINAZIONE DEL TENORE IN PESO DI AMIDO E DEI SUOI PRODOTTI DI DEGRADAZIONE COMPRESO IL GLUCOSIO 1. Oggetto e campo di applicazionea) Il metodo permette di determinare il tenore in peso di amido e i suoi prodotti di degradazione compreso il glucosio («Amido»).b)Il tenore in peso di «amido» citato al punto 1a) è uguale al valore E, come calcolato nel punto 6 del presente metodo. 2.PrincipioIl campione viene disgregato con idrossido di sodio e l'amido viene scisso in unità di glucosio, con amiloglucosidasi. Il dosaggio del glucosio viene effettuato per via enzimatica. 3.Reattivi(utilizzare acqua bidistillata).3.1.Soluzione di idrossido di sodio 0,5 N (0,5 moli/l).3.2.Acido acetico (glaciale) al 96 % come minimo.3.3.Soluzione di amiloglucosidasi: immediatamente prima dell'impiego, sciogliere circa 10 mg arniloglucosidesi EC 3.2.1.3) (6 U/mg) in un ml d'acqua (1).3.4.Tampone trietanolamina: sciogliere 14,0 g di cloridrato di trietanolamina [cloruro di tris (2-idrossietil) ammonio] e 0,25 g di solfato di magnesio (MgSO47H2O) in 80 ml d'acqua, aggiungervi circa 5 ml di soluzione di idrossido di sodio 5 N (5 moli/l) e aggiustare il pH a 7,6 con una soluzione di idrossido di sodio 1 N (1 mole/l). Portare a 100 ml con acqua. Questo tampone si conserva per almeno 4 settimane a 4 °C.3.5.Soluzione di NADP (Nicotinammine-adenina-dinucleotide fosfato, sale disodico): sciogliere 60 mg di NADP in 6 ml di acqua. Questa soluzione si conserva per almeno 4 settimane a 4 °C.3.6.Soluzione di ATP (Adenosina-5 -trifosfato, sale disodico): sciogliere 300 mg di ATP 3H2O e 300 mg di idrogenocarbonato di sodio (NaHCO3) in 6 ml di acqua. Questa soluzione si conserva per almeno 4 settimane a 4 °C.3.7.Sospensione di HK/G6P-DH [HK (EC 2.7.1.1 (esochinasi)] e [G6P-DH (glucosio-6-fosfato deidrogenasi)] (EC 1.1.49): mettere in sospensione 280 U di HK e 140 U di G6P-DH in 1 ml di soluzione di solfato di ammonio (C = 3,2 moli/l). Tale sospensione di conserva almeno un anno a 4 °C. 4.Apparecchiatura4.1.Agitatore magnetico con bagnomaria a 60 °C.4.2.Barrette magnetiche.4.3.Spettrofotometro UV, munito di una vaschetta di 1 cm.4.4.Pipette per l'analisi enzimatica.5.Procedimento5.1.Disgregazione mediante idrossido di sodio e idrolisi enzimatica dell' «amido».5.1.1.In base al tenore presunto di «amido», scegliere le pesate come appresso indicato (il tenore in «amido» non deve superare 0,4 g per pesata): >SPAZIO PER TABELLA> 5.2.6.Per il campione di riferimento (bianco) e di quello in analisi (campione), calcolare la diferenza di assorbanza E2 - E1. Sottrarre la differenza di assorbanza del riferimento (bianco) da quella del campione (= AEAA): (AEAA = AEAA campione - AEAA bianco) Da questa differenza si ottiene il tenore in glucosio della soluzione del campione: Contenuto in glucosio in g/l della soluzione del campione >SPAZIO PER TABELLA> (3,22 = volume della soluzione; 1 = tragitto della luce nella cella (cm); 0,1 = volume della soluzione del campione (ml); il peso molecolare del glucosio è 180,16 g/moli) 5.2.7.Se la misura dell'assorbanza non è possibile a 340 nm, la misura può essere fatta alla lunghezza d'onda di 365 nm o 334 nm. La cifra 6,3 della formula Gl di cui sopra deve essere sostituita con 3,5 o 6,18 rispettivamente. 6.Calcolo e espressione dei risultatia)Tenore in «amido» E in g/100 g: >SPAZIO PER TABELLA> b)Tenore in glucosio Z in g/100 g: >SPAZIO PER TABELLA> in cui: Gl = glucosio in g/1 (5.2.6); f= fattore di diluzione (5.1.1); p= pesata del campione, in g; 0,9= fattore di conversione del glucosio in amido. Osservazione:1. Qualora si constati che la soluzione non può essere filtrata come indicato nel punto 5.1.7, il chimico prenderà le misure necessarie. 2.Qualora si sia constatata una inibizione degli enzimi, è consigliabile usare il metodo delle «aggiunte dosate» utilizzando amido puro per ricavare un fattore di correzione. (1) Dove U è l'unità internazionale dell'attività enzimatica. ALLEGATO II DETERMINAZIONE DEL TENORE IN AMIDI, FECOLE, DESTRINE E ALTRI AMIDI MODIFICATI, CONTENUTI NELLE MERCI DELLE SOTTOVOCI DA 3505 20 10 A 3505 20 90 DELLA NOMENCLATURA COMBINATA E IN SOSTANZE AMIDACEE CONTENUTE NELLE MERCI DELLE SOTTOVOCI DA 3809 10 10 A 3809 10 90 DELLA NOMENCLATURA CAMBINATA I. Principio L'amido, per idrolisi acida, è trasformato in zuccheri riduttori che sono dosati volumetricamente mediante il liquido di Fehling. II.Apparecchiatura e reattivi 1. Pallone di circa 250 ml, 2. Pallone tarato di 200 ml, 3. Buretta di 25 ml, 4. Acido cloridrico di densità 1,19, p.a., 5. Soluzione di potassa caustica, 6. Carbone decolorante, 7. Liquido di Fehling, 8. Soluzione di bleu di metilene all'1 %. III.Procedimento In un pallone di circa 250 ml introdurre un campione corrispondente ad una quantità d'amido di circa 1 grammo. Aggiungere 100 ml di acqua distillata e 2 ml di acido cloridrico. Portare a ebollizione a riflusso per 3 ore.Travasare il contenuto del pallone nonché il prodotto della sciacquatura in un pallone tarato di 200 ml, aggiungendovi la soluzione di potassa caustica fino ad ottenere una reazione leggermente acida. Completare il volume fino a 200 ml mediante acqua distillata e filtrare il tutto su un po' di carbone decolorante.Successivamente versare la soluzione in una buretta e ridurre 10 ml di liquido di Fehling secondo il metodo seguente:in un pallone a fondo piatto di circa 250 ml versare 10 ml di liquido di Fehling (5 ml di soluzione A e 5 ml di soluzione B). Agitare fino ad ottenere una soluzione limpida, poi aggiungere 40 ml di acqua distillata e una piccola quantità di quarzo o di pietra pomice.Collocare il pallone su una piastra di amianto di forma quadrata recante al centro un'apertura circolare del diametro di circa 6 cm e posta a sua volta su un reticolo metallico. Riscaldare il pallone in modo che il liquido entri in ebollizione dopo 2 minuti circa.Mediante una buretta aggiungere, a più riprese, al liquido in ebollizione, quantitativi di soluzione zuccherina finché il colore azzurro del liquido di Fehling diventi appena percettibile; aggiungere poi come indicatore 2 o 3 gocce di soluzione di bleu di metilene. Completare la titolazione aggiungendo goccia a goccia un nuovo quantitativo della soluzione zuccherina fino alla scomparsa del colore azzurro dell'indicatore.Per maggior precisione, ripetere la titolazione nelle stesse condizioni, aggiungendo però in una sola volta quasi tutta la soluzione zuccherina necessaria alla riduzione del liquido di Fehling. In questa seconda titolazione, la riduzione del liquido di Fehling deve avvenire perciò entro 3 minuti. Continuare l'ebollizione per 2 minuti esatti. Completare la titolazione aggiungendo goccia a goccia durante il terzo minuto fino alla scomparsa del colore azzurro dell'indicatore.La percentuale in peso d'amido del campione è espressa dalla seguente formula: >SPAZIO PER TABELLA> in cui:T : rappresenta la quantità in grammi di destrosio anidro corrispondente a 10 ml di liquido di Fehling (5 ml di soluzione A + 5 ml di soluzione B). Questo titolo è di 0,04945 g di destrosio anidro quando la soluzione A contiene 17,636 g di rame per litro; n:rappresenta il numero di ml della soluzione zuccherina impiegata per la titolazione; p:rappresenta il peso del campione; 0,95:rappresenta l'indice di conversione del destrosio anidro in amido. IV.Preparazione del liquido di Fehling Soluzione A: sciogliere, in un pallone tarato, mediante acqua distillata, 69,278 g di solfato di rame cristallizzato puro per analisi (Cu SO4 7 5 H2O) esente da ferro, e portare la soluzione al volume di 1 litro mediante acqua distillata. Il titolo esatto di questa soluzione dovrà essere verificato mediante determinazione quantitativa del rame.Soluzione B:sciogliere, in un pallone tarato, mediante acqua distillita, 100 g di idrossido di sodio e 346 g di bitartrato di sodio e di potassio (sale di Seignette) e portare la soluzione al volume di 1 litro mediante acqua distillata.Le due soluzioni A e B devono essere mescolate in volume uguale immediatamente prima di essere impiegate. Seguendo il procedimento di cui al punto III, 10 ml di liquido di Fehling (5 ml di soluzione A e 5 ml di soluzione B) risultano completamente ridotti da 0,04945 g di destrosio anidro.
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